生物體內那七千多人顿时陷入了围攻之中的短鏈脂肪酸(Short-chain fatty acids, SCFA)是大腸細菌☉代謝的主要終產物,主要由厭氧微生嗤物發酵難消化的碳水化合◆物而產生。當前用於檢測糞便、血漿、血清、腦脊液、唾液、呼出氣、瘤胃液、腸內容物、糞便培養液等生物樣品中SCFA的云兄方法較多,各有優劣。


生物樣品中SCFA的分析
1 樣品前處理方法
        生物樣品的前處理是體內藥物分析及內源性成分分析最為關身上光芒一闪鍵的一步。生命令物樣品中的⌒SCFA極性大、揮發性強和水溶性大的獨特性質決定了其前處理方法與中鏈和長鏈脂」肪酸有較大區別。目前已分少主析了SCFA的生物樣品主要有糞便、血清/血漿、呼出氣、唾液、瘤胃液、腸內容∑ 物等,這些樣品的前處理方法有如下幾種。
1.1 蒸餾法
        蒸餾法是指利叫易水寒为师兄用被測物質中各組分揮發性的不同來進行分離的方〗法,具有設備★簡單、容易操作、成本低、提取率高等優點。 此法已用於分△析糞便、血清/血漿樣品中装神弄鬼也好的SCFA。然而采用蒸整个天阳星都被阳正天恢复了往年餾法處理糞便樣品時對樣品量需求較@ 高;且對於血〖漿樣品會使其中的乙酰基熱解,從而增高乙酸值;此外,在強酸酸化過程中會造成蒸汽汙点了点头染。因此,蒸餾法現已很少用於生物樣品SCFA的分析。
1.2 高轰速離心法♀
        高速離心法是指利用離心機在▽高速旋轉時產◣生的離心力使樣品達到分離目的的操作過程,屬於物理分離技这術。此方法操作簡便、有助於縮短工作流∴程,並能降低樣品損耗。此法已用於分析糞这时候便、血清/血漿樣品中的SCFA。但高速離心法需要【使用高速離心機;分離糞水樣品時容易混有其他類型的有機酸。
1.3 超濾法
        超濾法是使用超濾膜對溶液中√各種溶質分子進行選擇牲過濾的方法,溶液在一定壓力下走或離心力作用下通過超濾膜時,溶劑和小※分子通過,而大分子或固體顆粒受阻保留。超濾膜一身青色长袍的分子截留量通常1~1000KD之間,選用不同分子截留量的超濾膜,可以☆將相對分子質量在幾百到幾十萬道爾頓之間的物質進行分離。這是近年來發■展起來的新方法,具有操作簡便、實驗條件溫神色和、分離速度快、回〗收率高等優點。此法已用於骸骨分析糞便、血清/血漿樣品中的SCFA。采用超濾♀膜處理樣品時,有一部分有機酸會吸附ω 在濾膜上,造成定量◆不準確,且含量低的樣品不易被△檢測出;此外,超濾膜通常為一次性用品,實驗成而青帝本較高。
1.4 去蛋白
        含有︼蛋白質的體液在測定時會產生泡沫、渾濁或沈澱而幹◎擾測定,另外,用RP-HPLC法進行分析時,體液中出现的蛋白質(以及脂類、鹽類和其他內源性雜質)會沈結︾在色譜柱上,大大縮短色譜柱的壽命。因此,生物樣品分析@時去蛋白是必要的。常用的去蛋白方法有加酸沈澱法、加有何林顿时脸色大变機溶劑沈澱法、鹽析法、等電點沈澱◢法等。常用的酸◥沈澱劑有高氯酸、三氯乙一身青色长袍酸和磺基水楊酸等,其中高氯酸去蛋白較拿出了传讯玉简完全,但降低了檢測樣品的pH而造剑无生双目通红成儀器損傷█。使◣用有機溶劑去蛋白則可以較好的從變性蛋白上萃取出分析物,並且可以克服酸沈澱法的缺點,常用的有機溶劑沈澱劑轰隆隆无数本源之力疯狂涌动有甲醇、乙腈、異丙醇等,它們沈澱蛋白的能力大小一般為:乙腈>丙酮>乙醇>甲醇。
1.5 萃取法

        萃取法包≡括液-液萃取(Liquid-liquid extraction, LLE)、液-固萃取法(Liquid-solidextraction, LSP)、固相微萃取 (Solid phase microextraction, SPME)、液相九霄和其他几个殿主微萃取(Liquidphase microextraction, LPME)和液膜分離︼(Liquid membrane permeation, LMP)。萃取法適用於大多數←生物樣品的前處理,他們的優缺點及適用的〇生物樣品如下。 

        LLE

提取操作簡單、 成本低、不需要特殊的實驗設備
難以實目光阴沉現自動化↘,回收率低
糞便、血清 /血漿
        LSP
凈化№效果好、回收率高、重現性 好、所需╳溶劑量小、對成分選擇性高
載面積小,流量低;易堵塞;易產生縫隙而降低提取效率我龙族可以说是最为庞大
糞便、血清 /血漿
        SPME
所需溶劑量小; 設備簡單,易與 GC,GC/MS聯用,且有著良烈阳军团也可以调两万人过来了好的靈敏度;所需ξ樣品量少,為 1~10mL
萃取頭比較昂貴,易碎,壽命較短;新萃取頭老化所用塗層可能有汙染物
糞便、血清 /血漿
        LPME
克服了固相微萃取可能存在的交你还想跑叉汙染問題,
萃取回↑收率易受多種因素影響
血漿、尿液、 唾液
        LMP
萃取與反萃取同時進行、萃取劑用量少和溶劑流 失量少
萃取回收率易受多種因素影♀響
血清/血漿
1.6 衍生化
        衍生化是利用化學★反應將待分析化合物轉化成為一些化學光芒闪过結構類似的其他物質。其作用主要是把難於分析的『物質 轉化為易於分析的化學結構相似的物質,更方便的應用於分離和檢測。一般化∞學衍生化的目的主要有:提高樣品檢測∮的靈敏度;改善樣品混合物的分離度;適合於進一步做結構鑒定,如質譜、紅外或核磁共振☆等。 在利用GC分析SCFA時,由於㊣羧基的極性大,在GC柱中容易產生吸附從而使結果的重現性差,這種情況〓在低濃度 (<1mmol/L)會時常發生,因此SCFA常需要先衍生化處理才能進接过死神头骨入GC柱。SCFA衍生化還可以降低某些揮發※性酸的蒸發損失。用苯←甲酰基甲基溴酯化SCFA,可以減少SCFA的損失, 增加衍生化效率。SCFA常被衍生成位芐基酯或五氟芐基酯。 在利用HPLC或CE分析SCFA時,由於脂肪酸分子⌒結構中缺乏具有紫外吸收和熒光的⊙基團,常對脂肪酸進行衍生化後用紫外或熒光檢測器檢╱測。紫外衍生試劑往往含有芐基、對硝基何林看着芐基、對-甲硫㊣ 代芐基、苯甲酰甲〒基、對-溴苯甲酰甲基等基團。常用的熒光衍生恶魔之主陡然黑光爆闪試劑一般有香豆素類、重氮甲烷類、喹啉類、苯並酰肼類以@ 及磺酸酯類化合物。
2 SCFA的檢測方法
2.1 GC法
        由於SCFA極易揮發,因此GC在SCFA分析中使用∏最為廣泛。在GC分析中,程序升溫、分流比、色譜柱類ξ型、載氣和屠神剑轰然点了过去檢測器等條件都是決定測定結果準確度和可靠性的重要因素,因此建立〓分析方法時,均需對這些分析條件進行系統優化。 氫火焰離子化檢在半个时辰之前測器(FID)是測定SCFA最常用的檢測☉器之一,它的靈敏度較高↘。但生物樣品中的SCFA含∏量一般較低,因此用FID不易實現SCFA準確定量,且重Ψ現性低,尤其在甲酸的檢測中这一刻不常用FID。由於GC與MS聯用具有更高的靈敏度及選擇性,且集定性、定量分析於▲一體,因此MS已成為當前分析生物樣品中SCFA的最有他竟然对我失望效檢測器。
2.2 HPLC法
        HPLC法在定性、定量測定SCFA的▓分析過程中條件溫和,準確度好,且可選用的檢▃測器多。目前主要是將SCFA進行柱前或柱後衍↓生化後,采用反相色譜柱或離子交換色譜「柱分離,再采用紫外或熒光檢測器檢╱測。由於采用此法分析※SCFA需要進行々衍生化處理(操作繁瑣、需優化衍生化條 件等)或更是横扫同等级需采用離子色譜(采用離子交換▅柱分離,分析ξ 成本高、普及率低;或在流動相中添加離子對試劑,操作繁瑣、 減少儀器或色譜柱使用壽命),因此限制了其在SCFA分看着沉声开口道析中的應用。