考馬斯已经是形成了一道光幕亮藍G-250法(Coomassie brilliant blueG-250)是一種利用蛋白質-染料♂結合的原理,定量測定微量蛋白猛然间質濃度的快速、靈→敏的方法。考馬斯亮藍G-250存在著兩種不同的顏色形式,紅色和青】色。該染料在遊離狀態下為紅交流了起来色,在酸性溶液中可與蛋白質々的疏水區結合,顏色由紅色轉變成青色,其最大光吸收他们晚上来喝一顿酒由 λ 465 nm變成 λ 595 nm。在一定蛋白♀質濃度範圍內(1-1000μg),蛋白質-染料復眼神空洞洞得合物在 λ 595 nm下的□吸光度與蛋白質含量成正比。蛋白質和染料結合是一個很快的過程,約2 min即可十六匹宝马左右拱卫反應完全,呈∮現最大光吸收,並可穩定1 h,之後蛋白質-染料復合物發生聚合並沈澱出來。

1 試劑

10.05 mol/L 磷酸緩沖液(PBSpH 7.8

2100 μg/ml標準蛋白質溶眼神一闪液

3)考馬斯请容我细细亮藍試劑

2 實驗方法

       2.1 標準曲線的竟然就这么晋入了一种奇妙繪制

        取6支試管,按下表加入各試劑,混合均勻』後向各管中加入2.5 ml考馬斯亮藍試劑,搖勻並放◥置5 min左右,以0號試管▓為空白對照,在 λ 595 nm下測定吸光却又温和平静度。以蛋白質含量為橫坐▽標,以心里却在思索着吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

2.2 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置於預冷的研缽㊣中,分三次加入6 ml2 ml2 ml2 ml)預冷的磷酸◥緩沖液(pH 7.8),在冰浴上研磨不再拦截你们便是成勻漿,轉入10 ml離心管中,低溫12000 r/min離心20min,上清夜即為蛋白↑粗提液。

2.3 測定方法

吸取0.5 ml蛋白粗提液(用蒸餾孟有德脸上水適當稀釋後)放入試管中,加入2.5 ml考馬斯亮藍試劑,搖勻******************並放置2 min左右,以0號試管為空白對☆照,在 λ 595 nm下測定吸光度,通過標準曲線方程查得蛋◆白質含量。

2.4 計算公式


其中:

可溶性蛋白含量以每毫克每克鮮重表示(mg/g·FW);

C為查標準曲線哎呀宝宝值(μg);

Vt為提取︻液總體積(ml);

Vs為測定時提芣婜取液用量(稀釋前)(ml);

W為樣品鮮重(g)。