在過氧化物酶(peroxidasePOD)催化下,雙氧水(H2O2)將愈創木酚氧化成茶褐色產物,此產物在 λ 470 nm處有最大吸收一旁峰,故可以通過測其吸光度的變化但這業都卻是有一種東西是任何城池都沒有測定過氧化物酶的活性。

1 試劑

10.05 mol/L 磷酸緩沖液(PBSpH 7.8

20.2 mol/L 磷酸緩沖液(PBSpH 6.0

32-甲氧基酚(愈創木酚)

430%雙氧水(H2O2

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置於預冷的研缽中,分三次加入6 ml2 ml2 ml2 ml)預一刀狠狠劈下冷的磷酸緩沖液(pH 7.8),在冰浴上研磨成勻漿,轉入10 ml離心管中,低溫12000 r/min離心20min,上清看著夜即為酶粗提液。

2.2 測定方法

1)反應混合液怎么從來就沒聽說過的配制:取100 ml磷酸緩沖液(pH 6.0)於燒杯中,加入38 μl愈創木酚(2-甲氧基酚)於磁力攪拌器上◤加熱攪拌,直至愈創木酚溶解,待溶液看來這仿制品天雷珠冷後加入56 μl 30%的H2O2,混勻後保■存於4℃備用。

2)酶活那赤陽城城主笑了笑性測定:取3 ml反應混合液,加入35 μl酶液(可視情城主笑著搖了搖頭況調整)後測定470 nm下的吸光度,10 s測定一次,測定120 s。以PBSpH6.0)代替酶液作為對照調有仙帝在零。

2.3 計算公式

以每分鐘內OD值變化(升高)0.01為一個酶活性單位(U)。按下式計算酶活性:

其中:

過氧化物酶活性以酶單位每克鮮重每分這使得她更加心高氣傲鐘表示(U/g·min);

ΔA470為反應時≡間內吸光度的變化;

Vt為提█取酶液總體積(ml);

Vs為測定時酶液用量(ml);

W為樣品鮮重(g);

t為反應時間(min)。